Первая настоятельница Игумения Афанасия (1843-1861), прибыла в обитель из Оршанского монастыря. Она оставила заметный след в Гродненской обители. Благодаря её стараниям и пожертвованиям горожан была отремонтирована Рождество-Богородичная церковь, началось строительство храма прп. Сергия Радонежского. По прошению Игумении Афанасии и ходатайству архимандрита Игнатия (Железовского) осенью 1850 года все строения и подворья, принадлежащие монастырю, были освобождены от военного постоя, поземельного сбора и прочих повинностей.
Игумения Анастасия (Успенская) за годы настоятельства (1867-1876) в Гродненском монастыре оставила о себе память, как об очень доброй и любвеобильной наставнице. Награждена золотым наперсным крестом. Обрела покой на Гродненском городском кладбище.
Игумения Никодима (1876-1901) отличалась энергией и предприимчивостью. При ней совершилось чудо мироточения Владимирской иконы Богоматери 7 октября (ст.стиль) в 1877 г. Похоронена на Гродненском городском кладбище.
Игумения Елена (Коновалова) родилась 10 июля 1876 года в Черкизове Московского уезда в семье потомственного почётного гражданина, окончила Мариинскую гимназию в Санкт-Петербурге, а также окончила высшие педагогические курсы. В 22 года поступила в Леснинскую обитель. 5 октября 1900 года была назначена настоятельницей Красностокского Свято-Богородичного женского монастыря. 22 октября того же года возведена в сан игумении. За короткое время Игумения Елена очень много сделала, чтобы обитель стала образцовой: Красностокский храм был обновлён и украшен, устроена тёплая домовая церковь, при монастыре были образованы приют для сирот, школа для подготовки учительниц церковных школ. Устроена монастырская гостиница, сооружена народная чайная, библиотека, амбулаторная больница и аптека. Многие лекарственные растения культивировались в монастырском саду. Игумения Елена награждена золотым наперсным крестом. Годы игуменства (1892-1923).
Игумения Онуфрия (Арцукевич) поступила в Гродненскую обитель пятнадцатилетней девочкой в 1897 году. Её стараниями был восстановлен в 1931 году Богородице-Рождественский монастырский храм, разрушенный в Первую мировую войну прямым попаданием бомбы. В 1931 году Игумению Онуфрию направили в Обычскую обитель, что на Волыни. Годы игуменства (1923-1931, 1948-1953). Была похоронена на Жировицком кладбище.
Игумения Серафима (Фельдман) настоятельница с 1931 по1947 год. Родилась в Варшаве 1 марта 1880 года. Будучи по происхождению еврейкой, она ещё в детстве была крещена в Православной Церкви и, опасаясь расправы за принятие Православия, в 1897 году поступила в Лесниннский монастырь. В 1900 году вместе с будущей игуменией Еленой переехала в Красностокский монастырь. Там окончила двухгодичные курсы сестёр милосердия. 6 февраля 1916 года в Гродненской обители была пострижена в монашество. Находясь в Москве вместе с другими сестрами Красностокского монастыря в период Первой мировой войны, была назначена старшей сестрой милосердия в одном из Московских лазаретов. Её настоятельство проходило в тяжёлые годы немецкой оккупации. Похоронена на старом городском кладбище г.Гродно.
Игумения София (Порали) родилась в Сердобольском уезде Выборгской губернии 6 октября 1898 года. Поступила в Красностокский монастырь 4 августа 1910 года. 17 июля 1947 года была возведена в сан игумении. 1 октября 1949 года Указом Преосвященнейшаго Паисия, епископа Гродненского, игумения София освобождена от должности по состоянию здоровья. Матушка София была смиренной и незлобивой, за что её любили не только монахини, но и прихожане и паломники. Она любила детей и нищих, для них у неё всегда были «конфетка и копеечка» и доброе слово. Годы настоятельства (1947-1948). Обрела вечный покой в Жировицах.
Схиигумения Гавриила (Рисицкая) стала настоятельницей Гродненского Свято-Рождество-Богородичного женского монастыря 5 февраля 1953 года. Годы настоятельства (1953-1976). Много испытаний и скорбей пришлось пережить матушке Гаврииле за время настоятельства. Но самым тяжёлым испытанием для неё было - закрытие Гродненской обители в 1960 году и переселение сестёр в Жировицы на долгие 32 года.
Мария Митрофановна Рисицкая родилась 19 января 1894 года в Петербурге в семье мелкого чиновника, который вскоре умер, оставив семью без средств. Маленькую Марию отдали в приют при Красностокском Свято-Рождество-Богородичном женском монастыре недалеко от Гродно. В этом же монастыре находилась родная тётя Марии монахиня Илария, которая несла послушание казначеи обители и являлась начальницей местного Красностокского православного братства. Настоятельница монастыря игумения Елена и монахиня Илария сыграли основную воспитательную роль в жизни будущей схиигумении.
В праздник Благовещения Пресвятой Богородицы в 1914 году Матушка вступила в число насельниц монастыря и стала ближайшей помощницей и исполнительницей важных поручений Игумении Елены. В 1921 году была пострижена в рясофор и назначена казначеей монастыря.
Епископ Алексий (Громадский), заметив способности сестры Марии, благословил её ещё в 1922 году стать игуменией Гродненского монастыря, но Матушка не сочла себя способной принять это послушание и смиренно попросила владыку оставить её на прежнем месте. Тогда владыка поручил Матушке заботу о большом архиерейском доме, о его хозяйстве и служащих. Матушка показала себя хорошей хозяйкой, трудясь неустанно. Чуть позже, в 1934 году, инокиня Мария вместе с десятью сестрами Гродненского монастыря последовали вслед за владыкой Алексием на его новую кафедру в г.Кременец. В то время это был центр церковной жизни Западной Украины. Множество монастырей, среди которых большинство были женские,стали предметом попечения инокини Марии. Забота о монашествующих, о семинаристах, хозяйственные работы - было её главным послушанием...
По благословению Святейшего Патриарха Московского и всея Руси Алексия Первого (Симанского), 18 апреля 1953 года архиепископом Минским и Белорусским Питиримом, матушка была пострижена в монашество с наречением имени Гавриила и в этот же день в Гродненском Рождество-Богородичном женском монастыре, была возведена в сан игумении с возложением наперсного креста. При ней была налажена внутримонастырская жизнь и внешнее благолепие: шло строительство и переоборудование помещений, открывались приюты для детей-сирот, золотошвейная мастерская, свечной цех, построен игуменский дом и трапезная. В 1958 году игумения Гавриила за усердное служение Церкви Божией была награждена Святейшим Патриархом Алексием I наперсным крестом с украшениями.
После закрытия Гродненской обители и переселения в Жировицкий монастырь, спустя два года Матушка приняла тайный постриг в схиму. Оставшиеся четырнадцать лет, которые она прожила со своими сестрами в Жировицкой обители, никто из сестёр не знал об особом молитвенном подвиге их настоятельницы.
Будучи уже очень больной, схиигумения Гавриила составила акафист Божией Матери «Владимирской-Мироточивой», в котором выражены радость и переживания её и Гродненских сестёр, их благодарность Богу и мольба к Царице Небесной.
Схиигумения Гавриила мирно отошла ко Господу 12 июня 1976 года, в Троицкую родительскую субботу, когда в Успенском соборе Жировицкого монастыря начинали служить панихиду. Матушку похоронили, как она и хотела, на общем кладбище среди сестер Гродненской обители в Жировицах.
Матушка Гавриила была удивительно образованным и одарённым человеком, музыкально грамотной. Она была регентом монастырского хора, прекрасно пела, владела игрой на скрипке и фортепиано. Сохранилось несколько стихотворений, посвящённых сестрам Гродненского монастыря, написанных Матушкой. Она была чудной рукодельницей, вышивала золотом и шёлком. И всё, к чему она прикасалась, обретало изысканность и красоту. Матушку любили все, кто её знал, при этом ощущали её любовь, сердечное участие и помощь.
Схиигумения Евфросиния (Максимчук) была настоятельницей с 1976 по 1991 год. Матушка Евфросиния смиренно приняла игуменство и продолжала кротко управлять общиной сестёр в Жировицком монастыре. Молитва, труд, смирение, скромность, детская чистота - спутники Матушки Евфросинии, унаследованные ею от прежних гродненских сестёр. В 1991 г. Матушка Евфросиния с 14-ю гродненскими сестрами были направлены в возрождающийся Полоцкий монастырь. Вместе с собой она вывезла и все Святыни, принадлежавшие Гродненской обители и хранившиеся в Жировицком монастыре. К сожалению, во вновь возродившийся Гродненский монастырь возвращены лишь некоторые из них в период с 1992 по 2007 г. по благословению Высокопреосвященнейшего Митрополита Минского и Слуцкого Филарета, Патриаршего Экзарха всея Беларуси.
Игумения Гавриила (Глухова) - настоятельница с 10 мая 1992 года, с первых дней возрождения обители и по настоящее время. Возведена в сан игумении 23 июля 1995 года Патриархом Московским и всея Руси Алексием Вторым (Ридигер) в Богородице-Рождественском монастырском храме. Награждена наперсным крестом в 1993 году. В 2001 году за усердное служение Церкви Христовой награждена крестом «с украшениями».
Святейшим Патриархом Московским и всея Руси Алексием Вторым награждена орденом Русской Православной Церкви преподобного Сергия Радонежского в 1998 году к 40-летию и орденом преп.княгини Евфросинии Московской в 2008 году в связи с 50-летием со дня рождения.
Имеет орден Белорусской Православной Церкви преподобной Евфросинии Полоцкой, а также Блаженнейшим Митрополитом Варшавским и всея Польши награждена орденом Польской Православной Церкви св.равн.Марии Магдалины в 2007 году. Митрополитом Рижским и всея Латвии Александром награждена медалью Латвийской Православной Церкви св.священномуч. Иоанна Рижского в 2010 году .
Награждена в 2013 году государственной премией «За духовное возрождение общества » Президентом Беларуси А.Г.Лукашенко. Награждена премией «Человек Года Гродненщины» по итогам 2012 года. Удостоена звания «Женщина Года» в 2008 году. Имеет и другие награды и почётные грамоты.